聖安多尼堂為澳門三大古教堂之一，初期為一茅草覆蓋的簡樸小堂，約建於1565 年以前。教堂經過多次重建，庭院中大型石製十字架上刻有1638年的重建年份。教堂因1874年的甲戌風災而再度重建，至1930 年又翻修教堂的塔樓和外牆，始成今貌。在澳門，聖安多尼被奉為婚姻主保，過去葡人婚禮多在此舉行，新人和親友都手持鮮花，並用花卉佈置教堂，因此該教堂也被華人稱作 “花王堂”。
教堂外觀具新古典主義建築風格，整體設計簡潔莊重。正中央頂部的三角形山花設有一聖像龕，供奉聖安多尼像。主立面以橫線條為主，綠色門窗與水刷石飾面形成鮮明對比，正立面兩側以壁柱裝飾，其上方有球形基座錐形尖頂的頂飾。右側建有一座三層高的鐘樓，其頂部的弧形山牆飾有精緻的浮雕裝飾圖案，整體兼具實用性與藝術性。
教堂室內佈局呈長方形，以中廳為主，無柱廊阻隔。整體色調以白色和米黃色為主。天花為拱形結構，上方垂掛多盞枝形吊燈。兩側牆壁設有拱形壁龕，內安放聖人雕像。主祭壇為巴洛克風格，中央圓拱內為耶穌受難像。
每年6月13日前後的星期六或日，天主教澳門教區舉行聖安多尼瞻禮暨聖像出遊活動。活動前，教徒會參加共祭彌撒，隨後聖安多尼聖像出遊隊伍從聖安多尼堂出發，途經白鴿巢公園，最終返回教堂。這一歷史悠久的宗教儀式吸引眾多教徒和市民參與，體現了本地宗教文化的精髓與特色。
