981
国立医薬品食品衛生研究所
e-mail: kikura
＠
nihs.go.jp
981YAKUGAKU ZASSHI
128
(6) 981
―
987 (2008)
2008 The Pharmaceutical Society of Japan
―
Articles
―
指定薬物の分析
Part II
呈色試験及び
TLC
内山奈穂子，河村麻衣子，鎌倉浩之，花尻
(
木倉
)
瑠理，
合田幸広
Analytical Data of Designated Substances
(
Shitei-Yakubutsu
)
Controlled by thePharmaceutical AŠairs Law in Japan, Part II: Color Test and TLC
Nahoko U
CHIYAMA
, Maiko K
AWAMURA
, Hiroyuki K
AMAKURA
,Ruri K
IKURA
-H
ANAJIRI
,
and Yukihiro G
ODA
National Institute of Health Sciences
(
NIHS
)
, 1
18
1 Kamiyoga,Setagaya-ku, Tokyo 158
8501, Japan
(
Received January 11, 2008; Accepted March 11, 2008
)
Many psychotropic substances are readily available in Japan
via
the Internet. To avoid the spread of drug abuse,some drugs have been controlled as designated substances
(
Shitei-Yakubutsu
)
in Japan since 2007 by the Pharmaceuti-cal AŠairs Law. Twenty-nine designated substances
(
classiˆed as tryptamine, phenethylamine and piperazine types
)
were analyzed using color tests and TLC. The color tests were examined with the Marquis, Ehrlich, Simon's, Lieber-mann-Burehard's, and Mandelin reagents. The color of
b
-carbonyl-methylenedioxyphenetylamines produced by theMarquis reagent was yellow, and 4-halo-2,5-dimethoxy phenethylamines reacted with the Marquis reagent to a give deepyellow-green and
/
or a deep green color. Although all designated substances of the tryptamine type reacted with theEhrlich reagent to give a brown color, only 1-
(
2,4,6-trimethoxyphenyl
)
propan-2-amine
(
TMA-6
)
among thephenethylamines showed a red color on treatment with the reagent. However, 3,4,5-trimethoxy and 2,4,5-trimethoxyisomers of TMA-6 were not colored with the reagent. Thus, TMA-6 could be distinguished from isomers using theEhrlich reagent. We also analyzed the designated substances with thin-layer chromatography developed with two diŠer-ent solvent conditions. All substances were detected by UV
254 nm
and an iodoplatinate reagent. These results suggest thatcolor tests and TLC, followed by GC-MS and LC-MS analyses, can be used for preliminary identiˆcation of designatedsubstances.
Key words
―
psychotropic substance; color test; TLC; designated substance; shitei-yakubutsu; drug abuse
緒 言
深刻化する違法ドラッグ問題に対応するべく，平成
18
年の薬事法改正により，幻覚・中枢興奮等の精神毒性かつ保健衛生上の危害の恐れがある薬物及び植物を指定薬物として規制することとなり，
32
物質（
31
化合物
1
植物）が指定され，平成
19
年
4
月
1
日より施行された．さらに平成
20
年
1
月
11
日には，
5
化合物が新たに指定薬物として追加された．一部の指定薬物については，これまでにいわゆる違法ドラッグとして
GC-MS, LC-MS, TLC, IR
分析結果が報告されているが，
1,2
)
すべての指定薬物を網羅した分析報告はない．そこでわれわれは，
GC-MS
及び
LC-MS
を用いた指定薬物の分析方法を検討し，その結果を前報に
Part I
として報告した．
3
)
一般的に，違法薬物を正確に分析・同定するには
GC-MS
や
LC-MS
などの分析機器が必要となる．しかし，様々な現場でこれら機器が設置されているとは限らず，また一度に多量の検体を処理するためには予試験法があることが望ましい．米国では乱用薬物の予試験法として呈色試験が用いられているが，
4
)
日本において指定薬物の呈色試験による分析結果は報告されていない．そこで本研究では，迅速かつ簡易な予試験法として呈色試験及び
TLC
を用い，亜硝酸エステル類及び
Salvinorin A
を除く，
29
種類の指定薬物について分析を行ったので報告する．
実 験 方 法
1.
試料
指定薬物の名称，構造式，及び入手
982
Fig. 1. Structures of Chemical Drugs
a
)
Narcotic substances.
b
)
Non controlled substances. No marked-compounds are designated substances.
982 Vol. 128 (2008)
方法については前報（
Part I
）に記載した通りであるが，
3
)
本研究では，亜硝酸エステル類及び
Sal-vinorin A
を除く
29
種類の指定薬物を使用した．また，麻薬である
2C-B
[
2-
(
4-Bromo-2,5-dimethox-yphenyl
)
ethanamine
]
, DOB
[
1-
(
4-Bromo-2,5-dime-thoxyphenyl
)
propan-2-amine
]
, 2C-T-7
[
2-
(
2,5-Di-methoxyphenyl-4-propylsulfanyl-
)
ethanamine
]
,DMA
[
1-
(
2,5-Dimethoxyphenyl
)
propan-2-amine
]
, DOM
[
1-
(
2,5-Dimethoxy-4-methylphenyl
)
propan-2-amine
]
,DOET
[
1-
(
2,5-Dimethoxy-4-ethylphenyl
)
propan-2-a-mine
]
, TMA
[
1-
(
3,4,5-Trimethoxyphenyl
)
propan-2-amine
]
, TMA-2
[
1-
(
2,4,5-Trimethoxyphenyl
)
pro-pan-2-amine
]
, methylone
[
2-methylamino-1-
(
3,4-methylenedioxyphenyl
)
propan-1-one
]
, DOC
[
1-
(
4-Chloro-2,5-dimethoxyphenyl
)
propan-2-amine
］は，国立医薬品食品衛生研究所において分析用標品として調製し，
NMR
及び質量分析により構造を確認するとともに，
HPLC
及び
TLC
により純度を確認したものを使用した．なお，これら化合物の構造式は
Fig. 1
に示した．
2.
呈色反応
マルキス試薬，シモン試薬は市販品（関東化学）を用いた．エールリッヒ試薬は，
p
-dimethylaminobenzaldehyde 0.5 g
をエタノール：濃硫酸又は濃塩酸（
3
：
2
）混液
50 ml
に溶解し調製した．
5,6
)
マンデリン試薬は，バナジン酸アンモニウム
0.05 g
を濃硫酸
10 ml
に溶解したものを用いた．リーベルマン試薬は，亜硝酸ナトリウム
1 g
を濃硫酸
10 ml
に溶解し調製した．
5
)
呈色方法は，試料を白色液板上に取り各試薬を数滴滴下し観察を行った．
3. TLC
分析条件
薄層板は
Merck
製の
HPTLC plates Silica gel 60F
254
（
20
×
10 cm
，層厚
0.2 mm
）を用いた．試料はすべてメタノールに溶解して用いた．展開溶媒は，
(
A
)
ヘキサン／アセトン／トリエチルアミン（
10
：
10
：
1
），
(
B
)
メタノール／
25
％アンモニア水（
200
：
3
）を用いた．検出は紫外線照射（波長
254 nm
），及びヨウ化白金酸カリウム溶液噴霧による呈色を行った．ヨウ化白金酸カリウム溶液は，
10
％塩化白金酸
1 ml
に
4
％ヨウ化
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983
Table 1. Colors produced by ˆve reagents with designated substances
(
Shitei-Yakubutsu
)
Type ChemicaldrugsMarquisreagentEhrlichreagentSimon'sreagentLiebermann-Bure-hard'sreagentMandelinreagentTryptamine 5-MeO-MIPT Dark brown Grayish green
―
Dark brown Greenish brown5-MeO-DMT Dark brown Grayish green
―
Dark brown Deep greenishbrown5-MeO-AMT Dark brown Grayish green
―
Brown Deep greenishbrown5-MeO-DALT Brown Grayish green
―
Dark brown Greenish brown5-MeO-DPT Brown Grayish green
―
Dark brown Deep greenishbrown5-MeO-DET Brown Pale pink
―
Brown Deep greenishbrown4-OH-DIPT Brown Deep purple Grayish blue Dark brown Deep greenishbrown4-AcO-DIPT Brown Deep red purple Pale grayish blue Dark brown Greenish brownDPT Greenish brown Red purple
―
Brown Greenish brownDIPT Pale brown Red purple
―
Brown Greenish brownMIPT Greenish brown Red purple
―
Brown Greenish brownPiperazine 4MPP
― ―
Red purple Pale yellow Pale greenMBZP
― ―
Yellowish red Yellow Yellowish brownMDBP Deep Red purple
―
Blue Dark brown Deep brownPhenethylamine 2C-I Deep green
― ―
Brown Pale brown2C-C Deep yellow green
― ―
Pale yellow green Pale yellow green2C-E Pale brown
― ―
Yellow green Yellow green2C-T-2 Pale orange
― ―
Purple Purple2C-T-4 Pale orange
― ―
Purple PurpleDOI Deep green
― ―
Pale brown Yellow greenPMMA
― ―
Deep blue Deep red purple Brown4FMP
― ― ―
Orange Pale blueTMA-6 Brilliant orange Brilliant red Pale red purple Pale brown Deep redHMDMA Deep purple blue
―
Deep blue Deep brown Deep brownBDB Deep purple blue
― ―
Dark brown Dark brownMMDA-2 Greenish brown
― ―
Yellow green Brownbk-MBDB Brilliant yellow
―
Blue Greenish brown Brownbk-MDEA Brilliant yellow
―
Blue Greenish brown Brown2-aminoindan Dark brown
― ―
Yellowish brown Dark blue
983No. 6
カリウム
25 ml
を加え，さらに水
24 ml
を加えて調製した．
5
)
結果及び考察
1.
呈色反応
代表的な
5
種の呈色試薬（マルキス試薬，エールリッヒ試薬，シモン試薬，リーベルマン試薬，マンデリン試薬）を用いて試験を行い，その呈色結果を
Tables 1 and 2
に示した．なお今回分析を行った指定薬物は，トリプタミン系，ピペラジン系及びフェネチルアミン系化合物に分類される．まずマルキス試薬により試験を行ったところ，トリプタミン系化合物は緑みの茶色
茶色
焦茶色に呈色した．一方，フェネチルアミン系化合物では，
2,5
ジメトキシ体のうち，
4
位がハロゲンで置換された
2C-I, 2C-C, DOI
は黄緑色
濃緑色に呈色したが，
4
位がエチル基又はチオアルキル基を有する
2C-E, 2C-T-2, 2C-T-4
は淡茶色
淡橙色に呈色した（
Fig. 1, Table 1 and 2
）．そこで，これら指定薬物と同様に
2,5
ジメトキシ体である
2C-B, DOB,2C-T-7, DMA, DOM, DOET
（すべて麻薬）及び
DOC
についても呈色試験を行ったところ，すべて
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984
Table 2. Colors produced by the Marquis reagents withselected phenetylaminesType Chemical drugs Marquis reagentPhenethylamine2C-C Deep yellow green2C-B
a
)
Deep blue green2C-I Deep green2C-E Pale brown2C-T-2 Pale orange2C-T-4 Pale orange2C-T-7
a
)
Pale orangeDOC
b
)
Deep yellow greenDOB
a
)
Deep blue greenDOI Deep greenDMA
a
)
Greenish brownDOM
a
)
Pale yellowDOET
a
)
Pale brownHMDMA Deep purple blueBDB Deep purple blueMMDA-2 Greenish brownbk-MBDB Brilliant yellowbk-MDEA Brilliant yellowMethylone
a
)
Brilliant yellow
a
)
Narcotic substances.
b
)
Non controlled substances. No marked-compounds are designated substances.
984 Vol. 128 (2008)
陽性であったが，
4
位がハロゲンで置換された
2C-B, DOB, DOC
のみ濃青緑色
濃黄緑色に呈色した（
Fig. 1, Table 2
）．したがって，
4
位がハロゲン（
Cl, Br, I
）である
2,5
ジメトキシ体はマルキス試薬により濃黄緑色
濃青緑色
濃緑色に呈色することが示された．さらに，メチレンジオキシ体のうち，
b
カルボニル基を有する
bk-MBDB, bk-MDEA
は黄色に呈色し，同じく
b
カルボニル基を有する
me-thylone
（麻薬）も黄色に呈色した（
Fig. 1, Table 2
）．一方，
b
カルボニル基を持たないメチレンジオキシ体である
HMDMA, BDB, MMDA-2
は濃青紫色
緑みの茶色に呈色し（
Table 2
），
b
カルボニル基を持つがメチレンジオキシ基を持たない麻薬である
cathinone, methcathinone
は陰性であった（
datanot shown
）．したがって，
b
カルボニル
メチレンジオキシ体はマルキス試薬により黄色に呈色することが明らかとなった．次にエールリッヒ試薬により試験を行ったところ，トリプタミン系化合物は灰緑色
赤紫色
紫色
淡桃色に呈色したが，ピペラジン系化合物及びフェネチルアミン系化合物は，
TMA-6
を除いて陰性であった（
Table 1
）．一般的にエールリッヒ試薬はインドール環，芳香族第一級アミンや活性メチレンなどを呈色することが知られているが，
7
)
脂肪族第一級アミンかつ
2,4,6
トリメトキシ体である
TMA-6
は赤色に呈色した．そこで，
3,4,5
トリメトキシ体である
TMA
（麻薬）及び
2,4,5
トリメトキシ体である
TMA-2
（麻薬）についても検討を行ったところ，両化合物は陰性であることが判明した（
datanot shown
）．次に，エールリッヒ試薬で用いる硫酸
6
)
を塩酸
5
)
に変えて呈色試験を行ったところ，
TMA-6
は時間が経ってもほとんど呈色しなかった（
data not shown
）．以上の結果から，麻薬である
TMA
及び
TMA-2
と指定薬物である
TMA-6
は，硫酸を使ったエールリッヒ試薬による呈色試験により判別可能であることが示された．次にシモン試薬を用いたところ，ピペラジン系化合物である
4MPP, MBZP, MDBP
は赤紫色
黄みの赤色
青色に呈色した．また，フェネチルアミン系化合物のうち，脂肪族第二級アミンである
PMMA, HMDMA, bk-MBDB, bk-MDEA
は青色
濃青色に呈色した．また，脂肪族第一級アミンである
TMA-6
がわずかに陽性を示した（
Table 1
）．一方，トリプタミン系化合物のほとんどは陰性であったが，
4-OH-DIPT
及び
4-AcO-DIPT
のみが灰青色に呈色した．さらに，マンデリン試薬及びリーベルマン試薬を用いて試験を行った．その結果，トリプタミン系化合物はそれぞれ緑みの茶色
濃い緑みの茶色及び茶色
濃茶色に呈色したが，フェネチルアミン系化合物は様々な色に呈色することが判明した（
Table1
）．一方，ピペラジン系化合物に関しては，マンデリン試薬では
4MPP
は淡緑色，
MBZP
は黄みの茶色に呈色したが，リーベルマン試薬では両化合物ともに淡黄色
黄色に呈色した．また，
MDBP
は両試薬で濃茶色
暗茶色に呈色した．以上の結果から，系統的予試験法として呈色試験を用いた場合のフローチャートを
Fig. 2
に示した．まず，第
1
選択試薬としてマルキス試薬を用いることで，呈色反応の有無及び色の種類によりある程度の薬物が分類され，
2
番目にエールリッヒ試薬を用いることにより主にトリプタミン系化合物が分類される．
3
番目としてシモン試薬により主に第二級アミンが分類され，最後にリーベルマン試薬及びマンデリン試薬による呈色結果を参考に判別を行
985
Fig. 2. Proposed Flow Chart for Screening of DesignatedSubstances
(
Shitei-Yakubutsu
)
Using Color Test
985No. 6
う．このフローチャートはあくまでも薬物を特定するための目安であるが，呈色試験は迅速かつ簡易な分析法として適していると考えられる．
2. TLC
2
種類の展開溶媒を用い
TLC
を行った結果を
Table 3
に示した．今回使用したいずれの化合物も
UV254 nm
吸収により検出された．なお，指定薬物は通常標準品として入手し難いものが多いが，
5-MeO-DMT, 4MPP, PMMA, BDB
は市販されているので，これらを対象標準とすることができる．展開溶媒
A
及び
B
における各化合物の
Rf
値を比較したところ，いくつか特徴的な挙動が観察された．トリプタミン系化合物は，両展開溶媒で比較的良好に分離し，また展開溶媒
A, B
において，各化合物の
Rf
値はほぼ同程度の値を示した．しかし，
5-MeO-DMT, 5-MeO-AMT
は，展開溶媒
A
における
Rf
値（
0.16, 0.14
）が展開溶媒
B
における
Rf
値（
0.43, 0.33
）と比べて低い値を示し，また
DIPT
は，展開溶媒
A
における
Rf
値（
0.81
）が展開溶媒
B
における
Rf
値（
0.56
）と比べて高い値を示した．また，ピペラジン系化合物のうち，第二級アミンである
4MPP, MDBP
は，展開溶媒
A
における
Rf
値がそれぞれ
0.04
，
0.05
とほとんど上がらなかったが，第三級アミンである
MBZP
の
Rf
値は
0.27
であった．一方，展開溶媒
B
における
Rf
値はそれぞれ
0.36
，
0.33
，
0.48
であった．次に，フェネチルアミン系化合物について検討した．
2,5
ジメトキシ
フェネチルアミン類（
2C-I,2C-C, 2C-E, 2C-T-2, 2C-T-4, DOI
）では，展開溶媒
A
を用いると，
2C-I, 2C-C, 2C-T-2, 2C-T-4
がほとんど分離しなかった．他方，残った
2C-E
及び
DOI
は
Rf
値が
0.42, 0.40
とやや分離した．展開溶媒
B
では，
DOI
のみ良好な分離がみられ（
Rf
値＝
0.43
），他の化合物の分離は不十分（
Rf
値＝
0.31
0.34
）であった．フェネチルアミン系化合物では，展開溶媒
A
を用いると，
N
メチル体である
PMMA
及び
HMD-MA
の
Rf
値（
0.11, 0.09
）が展開溶媒
B
を用いた場合の
Rf
値（
0.35, 0.28
）と比べて低い値を示した．一方，
4-FMP
を除く一級アミン類（
TMA-6, BDB,MMDA-2, 2-aminoindan
）の
Rf
値は展開溶媒
A
，
B
において，ほぼ同程度の値を示した．また，
b
カルボニル体である
bk-MBDB
及び
bk-MDEA
も，展開溶媒
A
における
Rf
値（
0.39, 0.43
）が，展開溶媒
B
における
Rf
値（
0.66, 0.69
）と比べて低い値を示した．次に，スポットの呈色について検討した．ヨウ化白金酸カリウム試液を用いた場合，展開溶媒
A
では，
HMDMA
が白抜きとなった．一方，他の化合物は黄色
橙色
赤色
紫色に呈色したが，化合物の各系統による呈色の違いはみられなかった．また展開溶媒
B
では，
5MeO-AMT
が白抜きとなり，
4-OH-DIPT
が黄緑色に呈色したが，他の化合物は赤紫色
紫色
青紫色
淡青色に呈色し，こちらも化合物の各系統による呈色の違いはみられなかった（
Table 3
）．次に，ドラーゲンドルフ試液を用いた呈色について検討した．その結果，すべて含窒素化合物であるにも係わらず，一部呈色しない化合物があることが判明した（
data not shown
）．したがって，すべての化合物が検出可能なヨウ化白金酸カリウム試液が，指定薬物の
TLC
における呈色試薬として有効であると考えられた．以上，これら呈色試験及び
TLC
を用いることに
986
Table 3. TLC analyses of designated substances
(
Shitei-Yakugutsu
)
Solvent A Solvent B
(
n
-hexane
/
acetone
/
triethylamine
＝
10
/
10
/
1
) (
MeOH
/
25
％
ammonia solution
＝
200
/
3
)
Type Chemical drugs Rf values
a
)
Color
b
)
Rf values
a
)
Color
b
)
Tryptamine 5-MeO-MIPT 0.41 Whitish yellow
c
)
0.46 Red purple5-MeO-DMT 0.16 Red 0.43 Purple blue5-MeO-AMT 0.14 Red 0.33 White
c
)
5-MeO-DALT 0.70 Whitish red
c
)
0.76 Red purple5-MeO-DPT 0.73 Whitish yellow
c
)
0.69 Red purple5-MeO-DET 0.43 Whitish yellow
c
)
0.48 Red purple4-OH-DIPT 0.67 Yellow 0.56 Yellow green4-AcO-DIPT 0.61 Yellow 0.59 Pale purpleDPT 0.77 Whitish yellow
c
)
0.68 Red purpleDIPT 0.81 Whitish yellow
c
)
0.56 Red purpleMIPT 0.37 Red 0.49 Red purplePiperazine 4MPP 0.04 Red 0.36 Red purpleMBZP 0.27 Purple 0.48 PurpleMDBP 0.05 Red 0.33 Purple bluePhenethylamine 2C-I 0.34 Whitish orange
c
)
0.32 Red purple2C-C 0.33 Whitish orange
c
)
0.32 Purple2C-E 0.42 Whitish orange
c
)
0.32 Red purple2C-T-2 0.32 Orange 0.31 Red purple2C-T-4 0.36 Orange 0.34 Red purpleDOI 0.40 Whitish orange
c
)
0.43 Red purplePMMA 0.11 Whitish yellow
c
)
0.35 Pale red purple4FMP 0.36 Whitish orange
c
)
0.47 Pale red purpleTMA-6 0.27 Orange 0.30 Pale blueHMDMA 0.09 White
c
)
0.28 PurpleBDB 0.51 Red 0.58 Pale purpleMMDA-2 0.32 Orange 0.39 Pale bluebk-MBDB 0.39 Pale whitish yellow
c
)
0.66 Red purplebk-MDEA 0.43 Pale whitish yellow
c
)
0.69 Red purple2-aminoindan 0.45 Orange 0.45 Purple blue
a
)
Detected by UV
254 nm
.
b
)
Detected by an iodoplatinate reagent.
c
)
Colored spot on gray background.
986 Vol. 128 (2008)
よって，薬物をある程度絞り込むことが可能であり，指定薬物を同定するための予試験法として有用であることが示唆された．なお，指定薬物のうち，
2C-I, 2C-T-2, 2C-T-4
の
3
化合物は，平成
20
年
1
月
18
日より，麻薬及び向精神薬取締法の規制対象となるため，指定薬物から削除された．
謝辞
本研究は，厚生労働科学研究費補助金並びに，厚生労働省医薬品審査等業務庁費で行われたもので関係各位に深謝する．
REFERENCES
1
)
Doi K., Miyazawa M., Fujii H., Kojima T.,
Yakugaku Zasshi
,
126
, 815
823
(
2006
)
.2
)
Takahashi M., Hirofumi M., Nagashima M.,Seto T., Miyatake N., Suzuki J., KamimuraH., Yasuda I.,
Ann. Rep. Tokyo Metr. Inst. P.H
.,
54
, 51
55
(
2003
)
.3
)
Kikura-Hanajiri R., Kawamura M., UchiyamaN., Ogata J., Kamakura H., Saisho K., GodaY.,
Yakugaku Zasshi
(
in press
)
.4
)
U.S. National Institute of Justice, ``Color TestReagents
/
Kits for Preliminary Identiˆcationof Drugs of Abuse,''
〈
http:
//
www.ncjrs.gov
/
pd‹les1
/
nij
/
183258.pdf.2000.
〉
,10Dec.,2007.5
)
The Pharmaceutical Society of Japan,``Yakudokubutsu Shikenho to Chukai 2006
987987No. 6
Bunseki Dokusei Taishoho
,'' Tokyo KagakuDojin, Tokyo, 2006.6
)
The Pharmaceutical Society of Japan,``Yakudokubutsu Kagaku Shikenho to Chu-kai,'' 4th ed., Nanzando, Tokyo, 1992.7
)
MoŠat A. C., Osselton M. D., Widdop B.,``Clarke's Analysis of Drugs and Poisons,''3rd ed., Vol. 1, Pharmaceutical Press, Lon-don, 2004.
