ウイルスのコンタミネーション問題は確かに困難な問題ですね。提案されている改善方法について、私は以下のように考えます。 プライマー濃度を低くする: これは有効な手段です。プライマー濃度が高すぎると、非特異的な結合が増え、ネガティブコントロールでバンドが見える可能性があります。ただし、プライマー濃度を下げすぎると、反応効率が下がる可能性もありますので、バランスが重要です。 NASBAの時間を短くする: これも一理あります。反応時間が長いと、非特異的な増幅が起こりやすくなります。しかし、反応時間を短くしすぎると、目的の産物が十分に増幅されない可能性もあります。 これらの改善方法は理論的には正しいですが、実際の効果は試験してみないとわかりません。また、以下のような改善方法も考えられます。 プライマーの設計を見直す: プライマーが非特異的に結合する可能性がある場合、プライマーの設計を見直すことで問題を解決できるかもしれません。 試薬のロットを変える: 試薬自体が汚染されている可能性もあります。 可能であれば、試薬のロットを変えてみると良いでしょう。 PCRのセットアップを見直す: PCRのセットアップは非常に重要です。 可能であれば、テンプレートDNAを最後に追加するなど、コンタミネーションを防ぐ工夫をすると良いでしょう。 これらの方法を試してみて、どれが最も効果的かを見つけることが重要です。 下の回答は、増幅領域の内側に当たる部分にプライマーを設計し、PCRを行うことで、その領域がコンタミネーションされているかどうかを確認することができます。これは、特定の領域がコンタミネーションの原因であるかどうかを特定するための一般的な手法です、しかし、この方法が必ずしもすべての問題を解決するわけではないことを覚えておいてください。