100ngのGS-saRNA-1、GS-saRNA-2ベクターを用いて作製したGenScriptのeGFP saRNA（未修飾）と、他社のeGFP saRNAを、Lipofectamine MessengerMAX（Thermo Fisher）を用いてHEK293T細胞にトランスフェクションした。トランスフェクションの 24 時間後と 48 時間後に eGFP 発現を蛍光顕微鏡で観察し、マイクロプレートリーダーで解析した。
最適化製造のマーケットリーダー
直ちに使用可能なテンプレート（特許出願済み）と完全に最適化された製造プロセス
増強＆持続する発現
より低用量のRNAで強く持続的な発現を実現
多様なアプリケーションに
最適化されたベクター
| 直鎖状mRNA | 自己増幅型RNA | 環状RNA | |||||
 |  |  | |||||
| 構造 | 直鎖状で、5'末端と3'末端が露出する エキソヌクレアーゼによる分解を受け易い | 直鎖状で、5'末端と3'末端が露出する エキソヌクレアーゼによる分解を受け易い | 閉じた環状構造で、遊離した5‘末端や3’末端が無い エキソヌクレアーゼによる分解を受け難い | ||||
| リボソームの動員 | 5’ Capが翻訳開始に寄与し、mRNAを安定化させる | 5’ Capが翻訳開始に寄与し、mRNAを安定化させる | IRES (Internal Ribosome Entry Site) が翻訳開始に寄与する | ||||
| ORF |
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| ||||
| UTR | 5‘と3’のUTR構造はmRNAの安定性や翻訳促進に寄与 | mRNAの自己複製を促進するレプリコンを含む | IRES、PIE、およびその他エレメントを含む | ||||
| PolyA tail | RNA分子の分解を抑制し、安定化する | RNA分子の分解を抑制し、安定化する | 不要 | ||||
| タンパク質発現 | +++ Strong | +++++ Strongest | ++++ Stronger | ||||
| 発現の半減期 | +++ Shorter | +++++ Longest | ++++ Longer | ||||
| 免疫原性 | ++++ Low | ++ High | +++ Medium | ||||
| 必要投与量 | ++ High | +++++ Lowest | +++ Medium | ||||
| 新規性 | +++ Traditional | ++++ Novel | +++++ Novel | ||||
お客様のプロジェクトのニーズを満たすためのカスタムsaRNA合成サービス
| Vector Name | Capping type | Modification | Application |
|---|---|---|---|
| GS-saRNA-1 | Cap-AU | m5C or none | 遺伝子補充療法用に設計された低免疫原性ベクター |
| GS-saRNA-2 | Cap-AG | m5C or none | がん免疫療法やワクチン用に設計された高免疫原性ベクター |
| QC | Item | Test Method | Specification | RUO Standard | RUO Upgrade |
|---|---|---|---|---|---|
| Identification | Appearance | Visual inspect | Clear and free of foreign particles | ||
| RNA length | Capillary electrophoresis | Target ± 30% | |||
| RNA length | Agarose gel electrophoresis | Expected size band detected | |||
| Poly(A) length | Enzyme digestion and CE | Target ± 30% | |||
| RNA content | UV absorbance | Target ± 5% | |||
| PH | pH meter | Target ± 0.5 | |||
| Buffer specification | Client spec | N/A | |||
| Purity | A 260/280 ratio | UV spec | 1.70 ~ 2.30 | ||
| Capping efficiency | LC-MS | ≥ 90% | |||
| Size-based purity | Capillary electrophoresis | ≥ 70% | |||
| Safety | Endotoxin | Semiquantitative | < 10 EU/mg |
100ngのGS-saRNA-1、GS-saRNA-2ベクターを用いて作製したGenScriptのeGFP saRNA（未修飾）と、他社のeGFP saRNAを、Lipofectamine MessengerMAX（Thermo Fisher）を用いてHEK293T細胞にトランスフェクションした。トランスフェクションの 24 時間後と 48 時間後に eGFP 発現を蛍光顕微鏡で観察し、マイクロプレートリーダーで解析した。
GS-saGluc (GenScript：GenScriptがGS-saRNA-1 vectorを用いて調製したもの。5-メチルシトシン修飾済み) と、お客様が設計したsaGluc (Client) の発現を比較した。その結果、GS-saGLucはお客様が設計したsaGLucよりも高い初期発現と持続発現 (10倍以上) を示した。左：トランスフェクション後、12、24、48、96、144時間におけるルシフェラーゼ活性。右：お客様のデザインしたsaRNAに対するGlucの発現比 (Fold change)。
左：Agilent 5200 キャピラリー電気泳動で検出したGenScriptと他社のsaRNAの完全性。
中央：100ngのGS-saRNA-1、GS-saRNA-2ベクターを用いて作製したGenScriptのeGFP saRNA（未修飾）と、他社のeGFP saRNAを、Lipofectamine MessengerMAX（Thermo Fisher）を用いてHEK293T細胞にトランスフェクションした。トランスフェクションの 24 時間後と 48 時間後に eGFP 発現を蛍光顕微鏡で観察し、マイクロプレートリーダーで解析した。
右：異なるeGFP saRNAをトランスフェクションしたA549細胞におけるIL6レベルをELISAで検出した。
