アポトーシスのプロテオミクス Proteomics for Apoptosis

アポトーシスの研究分野でプロテオーム解析が進められている. これには, 細胞にアポトーシスを誘導する刺激を加えて発現が変化するタンパク質を検出する方法と, アポトーシス誘導因子に対して感受性と抵抗性の細胞株を樹立して比較検討する方法がある. 今回, 我々は上記の二つの方法を用いてアポトーシスに関連すると考えられるタンパク質をいくつか同定した.<br>45℃, 30分間の熱ショックによりヒトT細胞株の Jurkat の stathmin と thymosin β-4の発現が増強され, またヒト膵癌細胞株MIA PaCa-2には eukaryotic initiation factor 5Aの発現が減少することが確認された.<br>TNF-α感受性のKDH-8/YKと, 抵抗性のcKDH-8/11を樹立して細胞質内可溶性タンパク質の2DE分離像を比較すると, KDH-8/YKのみに発現するスポット1と, cKDH-8/11に強く発現するスポット2を認めた. このうちスポット2のタンパク質のアミノ酸配列を決定したところ, phosphatidylethanolamine-binding protein (PEBP) であることが明らかになった.

In these days proteome analyses are performed in the field of apoptosis. There are two methods to identify the proteins related to apoptosis. The first is to identify the proteins whose expression change after adding the stimuli which induce apoptosis in cells. The second is to compare 2DE pattern of intracellular proteins from two cell lines, one is sensitive against the inducer to apoptosis, and the other is resistant against this. We used these two methods and identified some proteins which may be related to apoptosis.<br>For the first, heat shock (45°C, 30min) induced the over expression of stathmin and thymosin β-4 in human T cell line Jurkat, and decrease of eukaryotic initiation factor 5A in human pancreatic cancer cell line MIA PaCa-2.<br>For the second, we established TNF-α-resistant cell line cKDH-8/11 and sensitive cell line KDH-8/YK from rat hepatoma cell line KDH-8. From differential display using 2-DE, we detected spot 1 which expressed in only KDH-8/YK, and spot 2 whose expression is increased in cKDH-8/11. The spot 2 was identified as phosphatidylethanolamine-binding protein (PEBP).